供試品抑細菌抑真菌試驗規程

供試品抑細菌抑真菌試驗規程
目的：
    建立供試品抑細菌和抑真菌試驗的基本操作，以判定供試品有無抑菌性，為采用直接接種法或薄膜過濾法進行無菌檢驗提供依據。
    2.  依據：    
     《中華人民共和國藥典》2000年版二部。
    3.  范圍：
     本標準適用于供試品有無抑菌性的驗證。
    4.  職責：
     QC無菌檢驗員對本標準的實施負責。
    5.  程序：
    5.1.  實驗用具：
 電熱恒溫培養箱、試管、試管架、刻度吸管、注射器、針頭、砂輪、75%酒精棉球。
    5.2.  培養基：
     需氣菌、厭氣菌培養基（流體硫乙醇酸鹽培養基）
     真菌培養基。
    5.3.  菌液：
    5.3.1.  金黃色葡萄球菌菌液[CMCC（B）26003]：取金黃色葡萄球菌的營養瓊脂斜新鮮培養物1白金耳，接種至營養肉湯培養基內，在30-35℃培養16-18小時后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每1ml中含10-100個菌。
    5.3.2.  生孢梭菌菌液[CMCC（B）64941]：取生孢梭菌的需氣菌、厭氣菌培養基新鮮培養物1白金耳，再接種至相同培養基內，在30-35℃培養18-24小時后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每1ml中含10-100個菌。
    5.3.3.  白色念珠菌菌液[CMCC（F）98001]：取白色念珠菌的真菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1白金耳，接種至真菌培養基內，在20-25℃培養24小時后，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至每1ml中含10-100個菌。
    5.4.  操作法：
    5.4.1.  取經過滅菌培養后的配制好的需氣菌、厭氣菌培養基2管，各加入金黃色葡萄球菌菌液1ml，再向其中1管加入規定量的供試品溶液。
    5.4.2.  取經過滅菌培養后的配制好的需氣菌、厭氣菌培養基2管，各加入生孢梭菌菌液1ml，再向其中1管加入規定量的供試品溶液。
    5.4.3.  取配制好經過滅菌及培養后的真菌培養基2管，各加入白色念珠菌1ml，向其中1管加入規定量的供試品溶液。
    5.4.4.  需氣菌、厭氣菌培養基管置30-35℃培養箱中，真菌培養基管置20-25℃培養箱中，培養3-5天。
    5.4.5.  培養期間內應逐日觀察并記錄是否有菌生長。
    5.5.  結果判斷：
    如培養基各管24小內微生物生長良好,則供試品無抑菌作用,如加供試品的培養基管與未加供試品的培養基管對照比較,微生物生長微弱緩慢或不生長,均判為供試品有抑菌作用。該供試品需用稀釋法或中和法、薄膜過濾法處理，消除供試品的抑菌性后，方可接種至培養基。
    6.  附：供試品抑真菌抑細菌試驗記錄ZL0080 00。